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在最新一代的《生化危机 4》中，玩家将扮演《生化危机 2》的男主角 里恩（Leon），里恩在本代中已成为美国政府的顶尖探员，为了执行搜索美国总统女儿的任务，深入欧洲的某个村落，遭遇到整村的狂暴村民，而陷入苦战。
不同于系列作传统的 2D 背景 3D 人物表现手法，本代将采用完全 3D 化的方式呈现，场景的范围也扩大许多，并以 16:9 的宽屏幕模式显示，不但视野更加广阔、行动更为灵活，游戏的进行也更加连贯，不再出现以往系列作传统的开关门读取画面。
在系统方面，因应全 3D 化的变革，玩家角色的行动也更加的自由，并加入了新的行动按钮（Action Button），除了原本以刀木仓的攻击之外，还可以搭配包括跳跃、翻墙、掀梯、破窗、脚踢...等各种因应状况而生的行动，例如可以手木仓射击敌人脚部，让敌人跪倒，再以脚踢的方式打败敌人，或者像是动作电影一般，施展翻墙破窗等矫健帅气的身手。
系统主要由第一人称视点以及另外两种第三人称新视点所构成，游戏中将以这三种视点交替进行，游戏的操作基本上与先前「生化危机」系列相同。与以往的《生化危机》系列作传统不同，在《生化危机 4》中，玩家的体力计量表与残余弹药数将会直接显示于画面上，恢复体力依旧是使用系列作中为大家所熟知的药草与急救喷雾罐，而游戏选单与以往的作品几乎是一样的。
而等待主角里恩的，是小至捕鼠器大至雷射光线等各式陷阱，而以敌人身分登场的村民们，似乎是以西班牙语彼此交谈着，与以往几乎没有思考与沟通能力，依照本能行动的殭尸与生化怪物们大不相同，他们能彼此沟通，具备思考能力，会以镰刀、斧头、长柄叉等许许多多锐利且可抛掷的凶器攻击玩家，会设置各式各样的陷阱，并使用各种手段引诱玩家落入圈套，其反应与行为就如同真人一般，但却又毫不留情的要至玩家于死地，令玩家感受到充满人类气息的威胁与恐怖感。而这些村民为什么要攻击里恩呢？是感染了新种病毒而变得残暴？或者是被不知名的存在所操纵？或者只是单纯的恐怖份子暴力集团？这些目前都还是个谜团。
面对狂暴村民们的威胁，里恩可将村民们抛掷过来的凶器以子弹击开，以行动按钮来实行因应各种环境与状况所能采取的应变措施﹔里恩也将配备有双筒望远镜，可以隐藏自己的行踪，像是躲藏在树木后面，以望远镜观察四周动静，游戏中也将会有狙击木仓的存在，配合上第一人称视点，可以说是加入了先前所没有的匿踪与狙击要素。
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