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藏獒人工授精的步骤及常用技术要诀
犬的人工授精是指用人工的方法,将公犬的精液采取出来,通过严格的科学检查处理,用鲜精液或冷冻精液,输入到母犬的生殖器官内,使精子与卵子结合,达到繁殖优良犬的目的.
一、采精
1 ．采精的准备工作
（ 1 ）场地的准备 为了保证公犬有一个良好的性欲反射条件,必须选好采精的场地.采精场应宽敞、安静、清洁,并要彻底消毒.
（ 2 ）台犬的准备 目前多采用发情的母犬作为台犬.采精前台犬的后躯、尾根部、外阴部、肛门部位,都应彻底洗涤清洁,再用消毒过的干抹布擦干.
2 ．采精技术
（ 1 ）手握法 当公犬爬跨,****勃起时,采精人员一只手抓住龟头的球状部位之后,另一只手拿着容器收集精液.在收集精液时,要特别注意器具不能触及龟头,否则会造成射精停止.另外,采精手应在龟头的背部必须保持一定的压力.用这种方法采到精液,可直接给发情的母犬输精,不宜保存.
（ 2 ）假阴道采精法 首先应根据公犬的****大小制作阴道,其结构主要由外壳、内胎、采精杯及附件组成.在应用时先在假阴道内胎中装上热水,其温度应保持 40℃.假阴道内表面不必润滑剂,因为发情母犬阴道略显干燥.当公犬爬跨母犬时,将****导入假阴道内、也可以用****的方法,待****勃起时,推进阴道,另一只手持龟头后的****,助手轻轻地打气,使假阴道产生一定的压力,以便刺激公犬继续射精.
二、精液品质检查
1 .精液量
藏獒的射精量,因其个体、年龄、采精方法、采精频率和营养状况等多种因素影响.射精量太多,可能是由于过多的副性腺泌物或其他异物混入,若过少可能是由于采精方法不当或生殖官功能衰退所致.发现这种情况就应该改进采精技术和方法,改进公大饲养管理或调整采精频率.
2 ．精液的色译大正常的精液为乳白色或灰白色,精子数量越多,乳白色越深.若精液呈淡绿色是混有浓液,呈淡红色是其中混有血液,呈黄色是混有尿液,凡属上述颜色的异常精液,应该丢弃或停止采精.
3 ．精子活率
是指精液中有改线前进运动的精子百分率,是评定精液品质优劣的重要指标之一,也称精子活力.检查方法是在载玻片上放1滴精液,用盖玻片压上,制成压片置于400倍的显微镜下观察.精子活率一般采用10级评分,即按精子直线前进运动的百分比评为10个等级： 100 ％前进者为 1 . 0 分,90 %前进的为0.9分,以下类推.
4 ．精子密度
是指精液的单位容积（1mL）内所含精子数目,是评定精液品质的一项重要指标,也称精子浓度.目前测定精子密度的方法主要采用估测法、血细胞计算器计算法 .
（ l ）估测法 此法通常与检查精子活率（不做稀释）同时进行,在显微镜下根据精子分布稠密程度粗略地分为"密"、"中"、"稀" 3 级.
① 密 整个视野充满精子,精子之间的空隙小于 l 个精子,看不见精子的活动情况,这种精液每毫升含有精子 10 亿以上.
② 中 精子在视野中比较分散,精子与精子之间的空隙约与精子本身长度相等,可以分清精子活动情况,这种精液每毫升含精子 3~10 亿.
③ 稀 在视野中只能见到少数精子,精子之间的空隙很大,这种精液每毫升含精子在 2 亿以下.
（ 2 ） 计算法 用血细胞计算器,在显微镜下计数,是比较准确的方法是先用血细胞吸管稀释精液之后将精液稀释20 倍时,用血红细胞吸管稀释：把精液稀释成 200 倍时,则用血红细胞吸管稀释.稀释液用 3 ％的氯化钠溶液,以杀死精子便于计算,其计数方法与血细胞计数相同.
5 ．精子的畸形率
是指形状不正常的精子.畸形情子种类很多,如头部巨大、瘦小、细长、圆形、轮廓不清、皱缩、缺损、双头等,颈部膨大、纤细、屈折、双体等,主段弯曲、屈折、回旋、短小、长大、缺陷、带原生质滴、双尾等,精液中的畸形精子的比率越高,受孕率就越低.一般认为,犬精子畸形率不得超过 20%.
6 ．精子的存活时间及存活指数
是指离体精子在一定条件下的寿命,这是判断精子受精能力的一项指标.将精液采出后,应立即稀释1: 2 ~3 倍,将稀释精液置于一定的温度（0℃~37℃ ）下,间隔一定时间检查精子活率,直至无活动精子为止,所需的总小时数为存活时间；两相邻2次检查的平均活率（即 2 次活率相加÷2 ）与间隔时间的积相加总和为生存指数.精子的存活时间越长,指数越大,说明精子活力越强,品质也越好,受精率也越高.
7. pH 值的侧定
测定的方法是用万能试纸比色或电动比色来侧定,犬的精液ph值平均为 6 . 4 （ 6 . 1~7 . 0 ） , pH 值的高低与副性腺分泌物有关,第一部分精液 pH 值居中、第二部分精液的 pH 值最低；第三部分精液的 pH 值最.pH值偏低的品质较好, pH值偏高的精子活力、受精力都显著降低.
三、精液的稀释
精液稀释的目的在于增加精液的容量,扩大配种头数.稀释液的成分很多．大致可分为以下 4 类.
1 ．稀释剂
主要用以扩大精液容量,如等渗氯化纳溶液、等渗葡萄糖溶液等.
2 ．营养剂
主要提供营养,以补充精子所消耗的能量,如葡萄糖、果糖、乳糖、蔗糖、鲜奶、奶制品、卵黄等.
3 ．保护剂
对精子起保护作用.其中有缓冲物质,如柠檬酸钠、酒石酸钾、钠、磷酸二氢钾、只羟甲基氨基甲烷、碱性缓冲液等；非电解物质,如各种糖类、氨基乙酸等；抗菌物质,如青霉素、链霉索、卡那霉素、林肯霉素、多黏菌素、氯霉素等；抗冻物质,二甲基亚飒等.
4 ．其他添加剂
酶类,如过氧化氢酶β一淀粉酶等；激素类,如缩宫类素,前列腺素 E 型等；维生素类维生素 B1、维生素B2、维生素B12、维生素 C 、维生素 E 等；其他成分,如二氧化碳、乙酸、乙二铵四乙酸、乙烯二醉、亚蹄酸钾、聚乙烯吡咯烷酮、ATP 、精氨酸、咖啡因、冬眠灵等.
四、常用稀释液的配制
1．奶粉稀释液
奶粉 10~12g,放在三角烧杯内,然后加人燕馏水100mL , 搅拌均匀后过滤,进行蒸煮消毒.
葡萄糖（蔗搪）稀释液：无水葡萄粮7g,溶解于100mL 蒸馏水中,过滤,煮沸消毒 .
2 ．奶粉、卵黄稀释液
取奶粉 10g先用少量水调成糊状,再加蒸馏水至 100mL用纱布过滤,在水浴中加温至 95 ℃ ,待冷却后加入卵巢10mL,青霉素 10 万ug,链霉素 10 万ug.
稀释倍数,一般根据原精液的密度来决定,通常犬精液可稀释 l~3 倍.
五、 精液的保存
精液的保存方法,可分为常温（ 15 ℃ 一 25 ℃ ）．低温（ 0 ℃ ~5 ℃ ）和冷冻？（-79 ℃~-l96％ ℃ ）
1． 常温保存法
主要是利用一定范围的酸性环境抑制精子的活动,以减少其能全的消耗.常温有利于微生物的繁殖,故需加入一定的抗生素.此外,加入必要的营养和保护物质,也会有良好的作用.用卵黄、拘橼酸钠稀释犬的第二部分精液,保存 4 天,精子仍其有活力.
2 ．低温保存法
一般用冰箱或冰块作冷冻源,也可以将贮精瓶浸人井水中.低温可以抑制精子的活动,降低精子的活动能量消耗,但是冷的刺激又影响精子的生命.所以在稀释液中必项加入营养物质,如卵黄、奶粉等.犬的第二部分精液用等量的卵黄和 2 . 68 ％枸橼粉酸钠溶液稀释,在 4 ℃ 的条件下保存,96小时后还能有 50 ％的仔活率；用巴氏灭菌的牛奶做等里稀释,在 4 ℃ 条件下能保存120 小时,存活率为 50% ,并能使母犬受孕.
3 ．冷冻保存法
利用-196℃的液氮、干冰-79℃ 或其他制冷设备作为冷冻源,将精液经过特殊处理后,保存在超低温下,以达到长期保存的目的.因分装形式不同,分为颗粒精液、塑料细管精液和安瓶冷冻精液.据报道,犬的冷冻精液解冻后活力低,受精率很低,有待于进一步研究,但取鲜精做人工授精,受精率较高,也是提纯复壮的好办法和可行技术.
六、输精
输精是指用输精器把精液愉送到母犬的生殖道内,使母犬达到受精的方法.
1．母犬的准备
将发情母犬保定后,尾巴拉向一边,将阴门及附近用温肥皂水擦洗 干净,并用消毒液进行消毒,而后再用生理盐水冲洗,之后擦干净.
2 ．输精管的准备
犬的输精管可用尼龙导管、玻璃细管等,使用前应彻底消和认真的检查,不能出漏洞.
3. 精液的准备
新采取的精液,经稀释后应进行品质检查,然后进行输精.保存的精液,需要升温到 35 ℃ 左右,经过镜检后合乎标准时,方可用来输精.
4 ．输精方法
将母犬站立保定,使输精管沿着背线方向缓慢地旋转插入阴道7~10cm深,于子宫颈口的位置,慢慢注人精液,输完精后,母犬的后躯抬高片刻,以防止精液流出.
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